هیبریداسیون پروب تقویت کننده چند برابر: تفاوت میان نسخه‌ها
Roshannna71 (بحث | مشارکت‌ها) صفحه‌ای تازه حاوی «یک روش جدید مبتنی بر DNA برای تعیین قابل اعتماد تعداد کپی لوکوس در ژنوم های پیچ...» ایجاد کرد |
(بدون تفاوت)
|
نسخهٔ ۱۷ ژوئن ۲۰۲۰، ساعت ۲۱:۴۹
یک روش جدید مبتنی بر DNA برای تعیین قابل اعتماد تعداد کپی لوکوس در ژنوم های پیچیده ,هیبریداسیون پروب تقویت کننده چند برابر multiplex amplification probe hybridization است.این روش به این واقعیت متکی است که پروب ها می توانند کمی باشند و پس از هیبریداسیون به الگوی DNA ژنومی باعث بهبود و تقویت بشوند.MAPH
از پروب هایی استفاده می کند که می توانند به طور خاص برای هر لوکوس ، تلومر ،قطعه کروموزومی و یا کل کروموزوم و تمام ژنوم انسان طراحی شده است که با وضوح بالاو حساسیت زیاد می توانند از دست دادن یا افزایش ژنومی را در توالی های DNA به اندازه 150 bp تشخیص دهند. تکنیکی برای ارزیابی تعداد نسخه (copy number) توالی مورد نظر و ارزیابی جهش های حذفی است، در این روش ابتدا DNA ژنومی دناتوره شده و در معرض چندین پروب قرار می گیرد. پروب ها مکمل توالیهای هدف بوده و همگی دارای جایگاههای مشابه اتصال به پرایمر در انتهای ۳ و ۵ خود هستند.در مرحله بعد پروب ها را در شرایط هیبریدسازی DNA ژنومی قرار می دهند (DNA ژنوم به یک فیلتر متصل شده است). پروب های اتصال نیافته شسته می شوند و پروب های اتصال یافته بازیابی (recovered) می شوند (از DNA ژنومی جدا می شوند) و به وسیله یک جفت پرایمر مشترک برای همه پروب ها تکثیر می شوند. مقدار محصول PCR حاصل از هر نوع پروب نسبت مستقیم با تعداد پروب ها در مخلوط واکنش دارد که نمایانگر تعداد نسخه ها است. پروب هایی که مکمل توالی حذف شده در ژنوم هستند، احتمالا هیچ محصولی در واکنش PCR تولید نمی کنند. همچنین اگر توالی هدف دچار جهشی شده باشد که مانع اتصال پروب شود، نیز هیج محصولی تولید نخواهد شد.[۱][۲]
=
- ↑ اصول ژنتیک پزشکی امری.
- ↑ Kousoulidou, Ludmila; Sismani, Carolina; Patsalis, Philippos C. (2010). "Multiplex Amplifiable Probe Hybridization (MAPH) methodology as an alternative to comparative genomic hybridization (CGH)". Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 653: 47–71. doi:10.1007/978-1-60761-759-4_4. ISSN 1940-6029. PMID 20721737.