پلاسمید
.svg)
پلاسمید (به انگلیسی: plasmid)، مولکول DNA کوچکی است که بطور مجزا از کروموزوم در سلول وجود دارد. همانند سازی پلاسمیدها در سیتوپلاسم و بطورمستقل از ژنوفور انجام میگیرد. پلاسمیدها معمولاً به شکل یک مولکول DNA دورشتهای حلقوی هستند (هرچند انواع خطی پلاسمید نیز وجود دارد). هر پلاسمید دارای یک محل آغاز همانند سازی (ori) است که همانند سازی پلاسمید از آن نقطه شروع میشود.
پلاسمیدها در باکتریها، آرکئا (آرکی باکترها)، مخمر و گیاهان بطور طبیعی دیده میشوند اما میتوان آنها را به شکل مصنوعی (ترانسفورماسیون) وارد سلولهای جانوری نیز نمود. در طبیعت، پلاسمیدها میتوانند موجب بهتر زنده ماندن ارگانیسمها شوند بطور مثال آنها میتوانند حامل ژنهای مقاومت آنتی بیوتیکی باشند. پلاسمیدها از طریق انتقال افقی ژنها(به انگلیسی: horizontal gene transfer) از یک باکتری به باکتری دیگر انتقال پیدا میکنند. پلاسمیدها معمولاً به شکل یک مولکول DNA دورشتهای حلقوی هستند (هرچند انواع خطی پلاسمید نیز وجود دارد).
اندازه پلاسمیدها از ۱ تا ۱۰۰۰ کیلوجفت باز متغیر است. از یک تا هزاران پلاسمید میتواند در یک سلول وجود داشته باشد. پلاسمیدها بیشتر اوقات از طریق کانژوگاسیون (یکی از مکانیسمهای انتقال افقی ژنها) از یک ارگانیسم به ارگانیسم دیگر منتقل میشوند.
واژه پلاسمید، اولین بار توسط زیست شناس امریکایی جوشوآ لدربرگ (به انگلیسی: Joshua Lederberg) در سال ۱۹۵۲ بکار گرفته شد.
محتویات |
وکتورها [ویرایش]
وکتورها، پلاسمیدهایی هستند که در مهندسی ژنتیک از آنها استفاده میشود. از پلاسمیدها در مهندسی ژنتیک برای تکثیر یا بیان ژن یا ژنهای خاصی استفاده میشود. برای این کار، ژن مورد نظر را وارد پلامسید میکنند. این نوع از پلاسمیدها بطور معمول دارای یک ژن مقاومت آنتی بیوتیکی (برای غربالگری) و یک جایگاه کلونینگ چندگانه (به انگلیسی: multiple cloning site) یا polylinker است. جایگاه کلونینگ چندگانه، قطعه کوچکی از پلاسمید است که دارای چند جایگاه برش برای آنزیمهای محدودالاثر مختلف (به انگلیسی: restriction enzymes) است. این کار سبب میشود که قطعه یا ژن دلخواه به راحتی وارد پلاسمید شود. در مرحله بعد، پلاسمید از طریق ترانسفورماسیون وارد باکتری میشود. سپس باکتری در معرض یک آنتی بیوتیک خاص قرار میگیرد. باکتریهایی که پلاسمید مورد نظر را داشته باشند، زنده میمانند زیرا ژن مقاومت آنتی بیوتیکی را بر روی پلاسمید مورد نظر حمل میکنند اما باکتریهایی که پلاسمید را نداشته باشند، میمیرند. با استفاده از این روش (غربالگری با آنتی بیوتیک) میتوان باکتریهای دارای پلاسمید را جدا ساخت و آنها را به میزان زیاد تکثیر داد. سپس پلاسمیدها را به میزان زیاد از آنها جدا ساخت. ظرفیت پذیرش قطعات DNA در پلاسمیدها بین ۱ تا ۱۰ کیلو جفت باز است. برای کلون کردن قطعات یا ژنهای بزرگتر بایستی از فاژ لامبدا، کاسمیدها (به انگلیسی: cosmids)، کروموزومهای مصنوعی باکتریایی (به انگلیسی: bacterial artificial chromosomes) یا کروموزومهای مصنوعی مخمری (به انگلیسی: yeast artificial chromosomes) استفاده کرد.
کاربردها [ویرایش]
مدلهای بیماری [ویرایش]
دانشمندان از دیرباز با استفاده از پلاسمیدها، سلوهای بنیادی جنینی موشها را تغییر میدادند تا بیماریهای ژنتیکی را مدلسازی کنند. البته این امر با محدودیتهایی روبرو بود که کاربرد گسترده تر آن در انسان را با چالش روبرو میساخت. با این حال، پیشرفت در زمینه تکنیکهای نوترکیبی در ویروسهای مرتبط با آدنو (به انگلیسی: Adeno-associated virus) و نوکلئازهای انگشت روی (به انگلیسی: Zinc finger nucleases) در ایجاد مدلهای بیماریهای ژنتیکی انسانی بسیار مؤثر بودهاند.
ژن درمانی [ویرایش]
موفقیت ژن درمانی بستگی به داخل سازی ژن دلخواه به درون کروموزوم انسان بدون ایجاد آسیب به سلول، ایجاد جهشهای سرطان زا یا پاسخ ایمنی داشتهاست. استفاده از وکتورهای پلاسمیدی، یکی از روشهای ژن درمانی است. استفاده از نوکلئازهای انگشت روی (به انگلیسی: Zinc finger nucleases) موجب نوترکیبی هومولوگ در جایگاه خاصی از کروموزوم میشود. از این طریق میتوان ژن دلخواه را وارد سلولهای انسانی کرد.
اپی زومها [ویرایش]
اپی زومها معادل یوکاریوتی پلاسمیدهای باکتریایی هستند. در یوکاریوتها بطور معمول اپی زومها، DNAهای حلقوی بستهای هستند که داخل هسته تکثیر پیدا میکنند مانند آدنوویروسها، هرپس ویروسها و پولیوماویروسها. برخی از اپی زومهای ویروسی در سیتوپلاسم تکثیر پیدا میکنند مانند پوکس ویروسها. برخی از اپی زومها مانند هرپس ویروسها از مکانیسم دایره غلتان (به انگلیسی: rolling circle) برای تکثیر خود استفاده میکنند مانند آنچه که در مورد فاژهای باکتریایی اتفاق میافتد. برخی از آنها از طریق مکانیسم همانند سازی دو جهته (به انگلیسی: bidirectional replication mechanism) تکثیر پیدا میکنند (پلاسمیدهای نوع تتا). در هر دو مورد، اپی زومها بطور فیزیکی مجزا از کروموزوم میزبان هستند.
انواع [ویرایش]
یکی از روشهای طبقه بندی پلاسمیدها بر اساس انتقال آنها به دیگر باکتریهاست. پلاسمیدهای هم یوغی (به انگلیسی: Conjugative plasmids) دارای ژنهای tra میباشند که در فرآیند هم یوغی (کانژوگاسیون) نقش دارد. در هم یوغی، پلاسمید از یک باکتری به باکتری دیگر منتقل میشود. پلاسمیدهای غیر هم یوغی توانایی آغاز هم یوغی در باکتریها را ندارند اما میتوانند با کمک پلاسمیدهای هم یوغی منتقل شوند. انواع مختلفی از پلاسمیدها ممکن است در یک سلول وجود داشته باشد. با این حال، پلاسمیدهای مشابه یا هم خانواده اغلب اوقات ناسازگار (به انگلیسی: incompatible) هستند بطوریکه فقط یکی از آنها در سلول باقی خواهد ماند. این امر به دلیل تنظیم عملکردهای حیاتی آنها اتفاق میافتد. پس بنابراین میتوان پلاسمیدها را در گروههای ناسازگاری مختلف طبقه بندی کرد.
روش دیگر طبقه بندی پلاسمیدها بر اساس عملکرد آن هاست:
- پلاسمیدهای F یا پلاسمیدهای باروری (به انگلیسی: Fertility) که دارای ژنهای tra هستند. آنها موجب بیان پیلی جنسی و هم یوغی در باکتریها میشوند.
- پلاسمیدهای R یا پلاسمیدهای مقاومت که ژنهای مقاومت نسبت به آنتی بیوتیکها یا ژنهای توکسینها (سموم) را حمل میکنند.
- پلاسمیدهای Col که ژنهای کد کننده باکتریوسینها را حمل میکنند. باکتریوسینها، پروتئینهایی هستند که میتوانند سایر باکتریها را از بین ببرند.
- پلاسمیدهای تجزیه کننده (به انگلیسی: Degradative plasmids) که این توانایی را به باکتری میدهند تا ترکیبات غیر معمول را تجزیه کنند مانند تولوئن و اسید سالیسیلیک.
- پلاسمیدهای بیماریزایی (به انگلیسی: Virulence plasmids) که موجب تبدیل یک باکتری غیر بیماریزا به یک باکتری بیماریزا (پاتوژن) میشوند.
تفاوت پلاسمید با کروموزوم [ویرایش]
پلاسمیدها، عناصری ژنتیکی هستند که ضرورتی چندانی برای سلول ندارند و تنها برخی ویژگیها را به باکتریها میدهند که به بقای آنها کمک میکند. در صورتیکه پلاسمیدهای سلول حذف شوند، سلول میتواند به زندگی خود ادامه دهد. همچنین همانند سازی پلاسمیدها ارتباطی با چرخه سلولی و تقسیم سلولی ندارد. آنها میتوانند مستقل از چرخه سلولی به تعداد نامحدود (تعداد را نیاز سلول و شرایط محیطی تعیین میکند) تکثیر شوند. در هر سلول ممکن است چندین پلاسمید مشابه وجود داشته باشد. با این وجود، کروموزومها بسیار برای سلول حیاتی هستند و درصورت حذف هر یک از کروموزومها، سلول خواهد مرد. تعداد دقیق کروموزومها، بسیار برای تعادل ژنتیکی سلول ضروری است. حتی اگر یکی از کروموزومهای همولوگ حذف شوند، این تعادل بهم خواهد خورد. همانند سازی کروموزومها دقیقاً منطبق با چرخه سلولی است و در هر چرخه سلولی فقط یک بار همانند سازی میکنند.
پلاسمید در مخمر [ویرایش]
دو نوع وکتور مهم پلاسمیدی در مخمرها عبارتند از YIp و YRp.
YIp، پلاسمید الحاقی مخمری (به انگلیسی: Yeast integrative plasmid) است که برای زنده ماندن و تکثیر وارد کروموزوم مخمر میشود. YRp، پلاسمید همانندساز مخمری (به انگلیسی: Yeast Replicative plasmid) است که پایداری کمتری دارد و در هنگام جوانه زدن مخمر ممکن است از دست برود.
پلاسمید در گیاهان [ویرایش]
پلاسمید در اثر عفونت با باکتری آگروباکتریوم وارد گیاه میشود. امروزه از اینگونه پلاسمیدها، پس از انجام تغییراتی بر روی آنها، برای انجام مهندسی ژنتیک در گیاهان، استفاده میشود.
پلاسمید در باکتریها [ویرایش]
بیشتر باکتریهای دارای پلاسمیدهایی میباشند که به آنها ویژگیهای تازهای مانند مقاومت به یک آنتیبیوتیک خاص، مصرف نوعی قند یا اسید آمینه، تولید رنگدانه، بیماریزایی، تجزیه هیدروکربنها یا مولکولهای پیچیده شیمیایی و غیره میدهد.
جستار وابسته [ویرایش]
منبع [ویرایش]
- Suwanto, A. , and S. Kaplan. 1989. Physical and genetic mapping of the Rhodobacter sphaeroides 2.4.1 genome: presence of two unique circular chromosomes. J. Bacteriol. 171: 5850-5859
- Suwanto, A and S. Kaplan. 1992. Chromosome transfer in Rhodobacter sphaeroides: Hfr formation and genetic evidence for two unique circular chromosomes. J. Bacteriol. 174: 1135-1145
- Trucksis et al. 1998. The Vibrio cholerae genome contains two unique circular chromosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 14464-14469
- Volff, J. -N. , and J. Altenbuchner. 2000. A new beginning with new ends: linearisation of circular chromosomes during bacterial evolution. FEMS Microbiol. Lett. 186: 143-150.
